产品货号：
BTN11-220847
中文名称：
mRNA纯化试剂盒(磁珠法)
英文名称：
mRNA Purification Kit
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是从总RNA中分离纯化高纯度mRNA的试剂盒。大多数真核生物的mRNA在其3'端都有Poly(A)尾，采用特殊设计的耦联Oligo dT磁珠与之杂交实现mRNA的分离。纯化得到mRNA可用于cDNA文库构建、二代测序、Northernblot等相关实验。
- 即开即用，操作简单。
- 运用磁珠为介质，具有较强的分离能力。
- 使用Oligo dT寡核苷酸能特异性的将mRNA从总RNA中分离出来。
- 分离的mRNA可用于下游的测序等工作。
- 本试剂盒足够10次的mRNA分离。
- 本制品仅供科研使用。
| 组分 | 规格 |
| 裂解/结合缓冲液 | 2mL |
| 清洗缓冲液 | 4mL |
| Oligo dT磁珠 | 100μL |
| RNase-Free ddH2O | 2mL |
保存：2～8℃，有效期1年。
磁力架，RNase-Free PCR管，RNase-Free的吸头等。
- 请使用RNase-Free和DNase-Free的枪头、离心管进行实验。
- 本试剂盒中裂解/结合缓冲液在实验过程中请小心吹打，避免产生过多气泡影响实验结果。
- 总RNA样品中应无DNA、盐离子(Mg2+、胍盐)、有机试剂残留，否则可能导致RNA降解或捕获效率降低。
一、mRNA捕获磁珠预处理
- 将Oligo dT磁珠从4℃冰箱取出，室温放置5min，涡旋混匀。吸取10μL Oligo dT磁珠于RNase-Free PCR管中，置于磁力架上1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
- 将RNase-Free PCR管从磁力架上取出，加入50μL裂解/结合缓冲液，小心吸吹磁珠，将磁珠混匀后放置在磁力架上1min，待溶液澄清，小心吸弃上清。
- 再次加入50μL裂解/结合缓冲液重复洗涤一次。
- 最后加入50μL裂解/结合缓冲液，将磁珠重悬于50μL裂解/结合缓冲液，室温放置备用。
二、样品RNA的制备
将总量0.1～4μg的总RNA用RNase-Free ddH2O稀释至50μL，并置于冰上备用。
三、mRNA纯化步骤
- 按下表加入各成分配制mRNA捕获反应体系：
成分 用量 处理后的mRNA捕获磁珠 50μL 总RNA 50μL 总体积 100μL - 将配制好的反应体系吹打混匀后，执行以下程序（置于PCR仪中，启用热盖99～105℃均可），按下表时间-温度参数进行反应：
温度 时间 65℃ 2min 20℃ 5min 4℃ ∞ - 将反应液取出置于磁力架上放置1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。加入200μL的清洗缓冲液，吹吸混匀，置于磁力架上1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
- 加入50μL RNase-Free ddH2O重悬磁珠，执行以下程序(置于PCR仪中，启用热盖99～105℃均可)：
温度 时间 65℃ 2min 20℃ 5min 4℃ ∞ - 向步骤6反应液中加入50μL裂解/结合缓冲液，反复吹吸混匀，20℃放置5min。
- 将步骤7的反应液置于磁力架上，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
- 加入200μL的清洗缓冲液，吹吸混匀，置于磁力架上1min，待溶液澄清后，小心吸弃上清。
- 将样品从磁力架上取出，加入6～15μL RNase-Free ddH2O，用移液器吹打混匀，室温放置2min。洗脱体积可根据需求自行调整，尽量充分洗脱产物。
- 置于磁力架上放置2min，待溶液澄清后，小心吸取上清至新的RNase-Free PCR管。
- 洗脱样品可立即用于RNA测序文库构建或其他分析应用，也可在-20℃保存过夜或在-80℃保存一个月。
相关搜索：mRNA纯化试剂盒(磁珠法)，mRNA纯化，mRNA分离，磁珠法，信使RNA纯化，Oligo dT磁珠，mRNA Purification Kit